| 1. |
Primer設計： |
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a. |
Forward primer：須有螢光標記（可請您的Primer合成廠商直接代為處理），本中心所使用Dye set為DS-33，可使用的螢光有FAM（藍色）、VIC（綠色）、NED（黃色）、PET（紅色）。 |
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b. |
Reverse primer：建議加上Poly A tail 可增進判讀的準確性及可靠性。 |
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| 2. |
每個樣本盤需保留2個空格在H11和H12的位置，因此每個樣本盤只放置94個樣本。此2個位置由STRP組加入Positive Control時使用，請勿加入任何液體或試劑。 |
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| 3. |
STRP PCR Product樣本盤製備方式 : |
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a. |
建議可將PCR Product進行Pooling的動作，Pooling的原則如下： |
| * |
相同片段大小的PCR Product，所標定的螢光不同，可以Pool在同一個Well。 |
| * |
標定相同螢光的PCR Product，其片段大小不同，亦可以Pool在同一個Well。 |
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b. |
製作Loading sample：PCR Product用水稀釋10~20倍來配製成Loading samples，稀釋倍數會因樣本而異。 |
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c. |
準備Hi-Di Formamide與Size standard的混合溶液，建議比例如下表： |
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| 每個樣本盤可任選一種Size standard |
混合比例 |
| Hi-Di Formamide：Size standard (LIZ 500) |
120：1 |
| Hi-Di Formamide：Size standard (LIZ 600) |
90：1 |
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d. |
在
欲放置樣本的96孔盤中之94個Well（H11和H12除外），各加入10 ul已配置好的Hi-Di Formamide與Size
standard混合溶液。用來盛裝樣本的96孔盤為MicroAmp 96 Well Reaction Plate或Thermo-Fast 96
Detection Plate。 |
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e. |
準備樣本盤：取1 ul已稀釋好的Loading samples，加入已放置10 ul Hi-Di Formamide與Size standard混合溶液的well中，每個well總體積為11 ul。 |
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f. |
未添加樣本的well也要加入11 ul Hi-Di Formamide與Size standard的混合溶液（H11和H12除外）。 |
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| 4. |
樣本盤製備完成後確認每個Well中沒有RNA、Protein、Salt、EDTA和其他異物（如雜質、顆粒和毛屑）。 |
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| 5. |
樣本盤的盛裝由用戶自行安排，若有分不同梯次的送樣，建議用戶每盤皆放置Control，作為不同批次結果比較的依據。 |
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| 6. |
NCGM所提供的結果為Raw data，不包含結果分析。用戶需親自至本中心使用GeneMapper v3.0軟體進行分析，首次使用軟體的用戶，本中心會提供教學服務，請用戶需要教學時先預約時間。 |
